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酶聯(lián)免疫測定的干擾物質

內(nèi)源性物質Boscato等指出，大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質，影響測定結果。主要的內(nèi)源性干擾物質有以下幾種。

 （1）類風濕因子   人血清中的IGG型類風濕因子（RF）,可與ELISA系統(tǒng)中捕捉抗體與標記二抗的Fc的段直接結合，從而導致假陽性。制造商采用F（ab）2替代完整的鼠IgG是的辦法。標本預先用熱變性IgG（63℃、10min）的固相吸附劑處理，可以除去RF的干擾。將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效。

  （2）補體   補體經(jīng)典活化途徑從CIq開始，在固相一抗和標記二抗的過程中，抗體分子發(fā)生變構，Fc的CIq分子結合位點暴露出來，則CIq可將二者連結起來，造成假陽性。用EDTA稀釋標本，亦可用56℃下30Min滅活補體的方法。

  為避免上述RF及補體的干擾，特別推薦禽類如雞、安，鵪鶉等的卵黃抗體，即IgY.它不激活哺乳動物的補體，不結合抗體分子的Fc，不與RF結合，從而避免假陽性。IgY也不結合哺乳動物細胞的Fc受體，為免疫組化提供方便。

   （3）嗜異性抗體   人類血清中含有可與鼠等嚙類動物Igs結合的天然的嗜異性抗體，可將一抗和標記二抗連接在一起，造成假陽性。在標本稀釋中加入過量動物的Igs有效然而亦可因加入的鼠Igs用量不足或者是亞類不同而失敗。

（4）醫(yī)源性誘導的抗鼠Igs抗體  臨床上逐漸開展用鼠源性CD3等單抗治療疾病、用放射性同位素標記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術，這些患者可能產(chǎn)生抗鼠抗體，而造成假陽性。此外，被鼠等嚙齒類動物咬傷后的患者體內(nèi)，可有抗鼠Igs的抗體，這要靠了解病史。測定抗原時，在標本中加入足量的正常鼠Igs，可克服由此而產(chǎn)生的假陽性。      

 （5）抗靶抗原的自身抗體   抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等的自身抗體，均可干擾抗原或抗體的測定結果，需要同時作抗原與抗體測定，有時自身抗體與待測靶抗原形成復合物，測定之前需要用理化方法解離后再測定。

  （6）交叉反應物質   與靶抗原有交叉反應的物質，如類地谷新、類aFP樣物質等，原來大都用多抗來測定抗原，這少數(shù)交叉抗原決定簇對測定結果的影響不大。現(xiàn)在普遍用單抗測定，倘若這個決定簇正好是所用單抗對應的靶決定簇，結果是不難相像的，會出現(xiàn)假陽性或假陰性結果。

其他物質：內(nèi)源性酶如堿性磷酸酶，過氧化物酶對二步夾心ELISA影響較少，主要干擾免疫組化的結果。而內(nèi)源性酶和底物，抑制酶活性的藥物等，對一步法ELISA干擾作用較明顯。此外，血清黏度過大、血脂過高、膽紅素、血紅蛋白等也有干擾作用。應該特別指出的是，還有一些體內(nèi)天然存在的物質，可與靶抗原互相結合而引起靶抗原變構，如已證實膽紅素和2離脂肪酸可結合aFP分子而導致其分子變構，與aFP分子結合的單抗還有Ca依賴性的差別。這些因素都可能會干擾aFP的測定結果。所以，aFP定量、定性測定不但不同試劑盒之間定量測定值的可比性很差，而且同一試劑盒的室間、室內(nèi)測定值的變化也較大。此外還經(jīng)常發(fā)生假陽性與假陰性結果。

外源性物質   采集血清標本時，加入的抗凝劑，如肝素、EDTA以及快速分離血清的分離凝膠等，均有干擾作用。標本儲存過程中的變化，如aFP可形成二聚體，影響定量測定。

測定試劑中含有酶抑制劑如Na3N,可抑制HRP活性。

除此之外，還有與操作人員的素質有關的實驗誤差，隨機誤差等問題。